性并使用进行分析。转型。我们将的基因组片段克隆到线性化二元载体中。子加上起始密码子上游包括’和终止密码子下游包括’。使用提取并使用高保真聚合酶进行扩增。该构建体通过根癌农杆菌导入敏感六倍体小麦品种中介导的转化。为了验证转基因的存在我们使用了两对独立的引物。引物扩增双元载体中存在的潮霉素抗性基因引物用酶消化扩增结构域的区域附录表。为了估计每个转基因事件中插入的
拷贝数我们使用了拷贝数测定其中包括作为单拷贝对照基
因。使用植物的后代测试进一步验证了这些结果。使用−Δ方法和肌中非共和国电子邮件列表动蛋白作为内源对照通过引物附录表估计转基因植物中的转录水平。使用中实施的检验来估计和转基因植物之间转录物水平差异的显着性。由于具有易受影响的等位基因该等位基因也可通过引物扩增因此我们使用引物和限制性酶进行半定量测试来补充此测试以区分这两个等位基因附录表。去补充材料补充文件点击此处查看。
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加州大学戴维斯分校 B2B电话列表 在孢子形成大小的量化方面提供的帮助；和谷物病实验室提供了关键材料；加州大学戴维斯分校基因组中心进行测序；和加州大学戴维斯分校植物转化设施用于小麦转化。实验室的工作得到了霍华德休斯医学研究所和美国农业部国家食品和农业研究所的美国农业部拨款的支持。实验室的工作得到了拨款项目国家植物病害恢复系统和国家研究计划竞争性拨款的支持。
