用量化相对图像强度。蛋白质表达和纯化。将和转化到大肠杆菌中。通过在°下添加小时在处诱导重组蛋白表达并通过×离心分钟收获。将细胞重悬于补充有μ溶菌酶和理裂解。将裂解物以×离心分钟并将上清液加载到含有用裂解缓冲液预平衡的树脂的柱上。用个柱体积的裂解缓冲液洗涤柱然后用个的洗涤缓冲液和咪唑洗涤。
用洗脱缓冲液咪唑洗脱蛋白质在下通过过夜蛋
白酶处理去除硫氧还蛋白标签后将溶液加载到用缓冲液β巯基乙醇和甘油预平衡的柱上用氯化钠。洗柱后用梯度的缓冲液含在个中洗脱蛋白质。对于标记的末端将大肠杆菌在肉汤中培养直至达到并在×下离心分钟。然后将细胞沉淀洗涤并重悬于缓冲液中次。将重悬的细胞在以作为唯一氮源的培养基中在英国电邮清单℃下恢复小时然后通过添加在℃下诱导过夜。圆二色光谱法。
使用光谱仪在°下记录范围内的远紫外光谱在
收集数据之 B2B电话列表 前将总共μ和μ均在和中转移至石英比色皿中。所有光谱均使用光谱分析进行缓冲液扣除和平滑处理。结果表示为平均残余摩尔椭圆率。核磁共振波谱。管中的样品含有μ含有标记的蛋白的缓冲水溶液磷酸钾和二甲基硅戊烷磺酸作为内部化学位移标准。所有数据均在配备低温探针的波谱仪上于下收集。使用方案收集二维光谱。的采集参数如下质子选择性脉冲中心为扫描间延迟秒每个增量扫描次维度累积个增量。溶剂暴露的数据是通过使用相位调制化学交换方案收集的其中具有毫秒交换混合每个增量次扫描以及维度中的次
