下轻轻摇动约小时直至原生质体释放到溶液中。消化后将含有原生质体的溶液通过μ尼龙网过滤然后以×离心用摆动桶搅拌分钟将原生质体沉淀在圆底管中。去除上清液将原生质体沉淀重悬于溶液葡萄糖和吗啉乙磺酸中此步骤为在原生质体孵育并在冰上重悬至少分钟之前重复一次。然后除去溶液并将原生质体重悬于溶液甘露醇和中终浓度为每毫升×个细胞。
对于原生质体转化总共大约将溶液中的原生质体与
μ质粒在冰上混合分钟。然后加入等体积约μ的钙溶液;甘露醇和并将混合物在室温分钟。孵育后缓慢加入溶液并轻轻混匀用吊桶以×离心分钟沉淀原生质体。用溶液洗涤两次后将沉淀轻轻重悬于溶液中并在涂有的六孔板中在室温下在黑暗中孵育指定的时间。测定。为了检测的直接靶基因使用马其顿电子邮件列表水稻原生质体系统进行检测。如所述进行交联并稍作修改。简而言之将构建体和构建体作
为对照分别转染到水稻原生质体中室温孵育小时后通过
×离心收集 B2B电话列表 转染的原生质体每次转染×个细胞分钟然后去除上清液。将收集的原生质体与溶液中的甲醛进行交联并在转子上在室温下轻轻混合分钟。为了淬灭交联反应添加μ甘氨酸并在转子；上以在室温下轻轻混合分钟然后以×离心°分钟去除上清用冰冷的×缓冲液冲洗原生质体。使用试剂盒目录号；进行染色质提取消化超声处理免疫沉淀反向交联回收和。这些程序遵循制造商提供的协议。蛋白质复合物用抗荧光素酶抗体；进行免疫沉淀每次免疫沉淀的浓度为μ。然后结合的片段
