和进行扩展如下所示。使用各自的引物对和扩增来自拟南芥叶绿体基因组的三个终止子和并添加重叠每个终止子的’末端有顺反子间表达元件’末端有两个限制性位点和。每个终止子分别用引物或在’端延伸或片
段产生四个基因间区域和图分别使用引物对和从提
取的基因组中扩增和基因在’端添加重叠到片段并在’端添加位点。每个基因的’末端。类似地从中扩增使用引物对。然后通过使用重叠延伸程序将每个基因间片段与相应的基因连接类似地生成日本短信网关和片段。将消化的和模块分别插入的位点分别获得和。然后将消化的和模块分别插入和的位点分别获得和载体用于遵循叶绿体转化程序用蓝藻基因替换天然基因。转质体烟草植物
的产生我们使用粒子输送系统和基于组织
培养的选择方法。用携带适当叶绿体转化载体的μ金颗粒轰击在无菌琼脂培养基中萌发的两周大烟草幼苗。两天后将叶子切成两半放在含有壮观霉素的琼脂平板上在°下培养周每天光照小时。从该介质中长出的芽被切成 B2B电话列表 约的小块并在相同的培养基中进行第二轮再生约周。然后将来自第二轮选择的芽转移至含有壮观霉素的琼脂培养基中生根然后转移至土壤中以在大气升高的温室室中生长。叶绿体基因组基因座的印迹分析我们合成了地高辛标记的探针参考序列的_与的探针合成试剂盒和引物对。使用基于的标准程序提取叶组织中的总。将液氮中冷冻的叶组织在管中的μ缓冲液十六烷基三甲基溴化铵氯化钠巯基乙醇中精细研磨并孵育在°下保持小时。用μ含有异
