菌中表达载体利用启动子表达插入的基因并在翻译蛋白的末端掺入标签。将表达载体转化感受态细胞用在诱导蛋白表达。在°和下生长小时后收获培养物中的细胞。将细胞重悬于约冰冷的磷酸钠氯化钠咪唑中并用超声破碎。离心除去细胞碎片上清液与树脂混合然后在重力流柱中用细胞悬液缓冲液洗涤并用含有μ的缓冲液洗脱结合的蛋白。毫米咪唑。采用评估的纯度并采
用法测定其浓度材料的冷冻制备和透射电子显
微镜使用高压冷冻装置以开尔文秒的速度冷冻固定叶子材料。冷冻固定样品的第二步冷冻置换是在装置中于°下在乙酸双氧铀的干燥丙酮溶液中进行小时。然后将样品在低温下渗透到树脂中并用紫外线灯短信网关斯洛文尼亚聚合。对于免疫金标记使用不同的兔一抗处理嵌入中的携带叶组织超薄切片的金网格来自的蓝藻;烟草;和由剑桥生化研究公司生产。使用与金颗粒英国缀合的兔山羊多克隆二抗进行标记。
使用在下运行配备相机和相机的透射电子显微镜获得图像
植物材料和生长条件转基因 B2B电话列表 和野生型烟草变种。在同一受控环境室中生长。小时荧光灯和小时黑暗白天°夜间°。白天湿度水平设置为夜间设置为。大气水平保持恒定在空气含有。蛋白质和叶绿素的定量叶匀浆中的总可溶性蛋白质通过标准布拉德福德法测定。使用结合测定或通过免疫印迹定量条带强度来确定粗匀浆中的活性位点浓度。每种方法都给出了非常相似的结果。通过分光光度法从粗匀浆中测定叶绿素浓度。羧化酶活性测量切割叶盘并在μ冰冷提