率,但它增加了诱变绕过率,从而允许转录的继续。与其他家族聚合酶一样,我们发现所有三种在上均以很高的速率错误掺入,这预示着转录中会出现频繁的→错误。频繁的→错误也可以从脱氨基作用中预测出来,而中的→高效率中预测出来。此外,我们发现错误掺入事件和氧化模板会促进转录复合物暂停,这可以通过的存在来克服。实验步骤核酸蛋白质和其他试剂寡脱氧核苷酸由爱荷华州定制合成和纯化。浓度由处的吸光度和计算的摩尔消光
系数确定 购自,经过纯化和’去保护脱盐 购买的带有’端
荧光素。高纯度溶液购自。如前所述纯化端标记的端标记的未标记的和未标记的。根据处的吸光度和计算的摩尔消光系数计算酶浓度。无启动子延伸底物的组装将模板非模板和’标记的以的比例在卢森堡企业电子邮件列表转录缓冲液乙酸盐,,乙酸镁,谷氨酸钠,%,最终浓度为μ,在°下加热分钟,然后从和°逐步冷却,各分钟,°冷却再加热分钟,最后达到°小时。用于测量复合物的平衡和解离速率的荧光各向异性研究荧光各向异性测量在中于°下进行。用转录缓
冲液中浓度逐渐增加的滴定荧光素标记的 在激发和发射后记录
荧光各向异性, B2B电话列表 并根据[]作图。将数据拟合到二次方程以获得平衡解离常数,如所述。通过在有或没有的情况下追踪荧光素标记的和与未标记的的复合物并监测荧光的减少来确定解离率由于荧光素标记的从解离而产生各向异性。将动力学拟合到单指数方程以获得解离速率。使用快速化学猝灭流动力学正确掺入核苷酸使用型化学骤冷流装置,奥斯汀,德克萨斯州在°下进行预稳态动力学实验。将转录缓冲液中的和延伸底物的混合物装入骤冷流仪器的一个注射器中,并从仪器的第二个注射器中添加。在预定的时